高效液相色譜儀是應(yīng)用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設(shè)備。它是由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。目前可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。下面我們就來了解一下高效液相色譜儀的操作方法!
高效液相色譜儀的操作步驟:
1、過濾流動相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜(0.45um)。
2、對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3、打開HPLC工作站,連接好流動相管道,連接檢測系統(tǒng)。
4、進入HPLC控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。
5、有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10 ml/min。
6、調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000。點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。
7、設(shè)計走樣方法。點擊file,選取select users and methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊new method。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據(jù)需要而不同。選完后,點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括:
?、佟⑦M樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;
?、?、基線歸零;
?、邸⑦M樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;
④、走樣時間,隨不同的樣品而不同。
8、進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。
9、關(guān)機時,先關(guān)計算機,再關(guān)液相色譜。